ELISA試劑盒檢測(cè)抗生素
氨基糖類、四環(huán)素類、喹諾酮類、硝基呋喃類等。目前國(guó)內(nèi)外可以用ELISA方法檢測(cè)的抗生素有：氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、恩諾沙星、泰樂(lè)菌素、磺胺喹惡啉、磺胺二甲基嘧啶、鹽霉素、磺胺類、阿維霉素、ELISA試劑盒檢測(cè)成本低靈敏度高檢測(cè)限通常可以達(dá)到限量要求，是一種理想的初篩方法。但由于ELISA方法存在一定的假陽(yáng)性率，因此用美聯(lián)免疫吸附法測(cè)定的陽(yáng)性樣品必須做進(jìn)一步的確定實(shí)驗(yàn)。
以氯霉素為例：、
氯霉素是由委內(nèi)瑞拉鏈霉素菌產(chǎn)生的一種廣譜抗生素，也是第一種用化學(xué)合成法生產(chǎn)的抗生素。氯霉素能抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，對(duì)革蘭氏隱形菌作用較強(qiáng)，敏感菌有大腸桿沙門(mén)氏菌，傷寒桿菌，副傷寒桿菌、痢疾桿菌、產(chǎn)氣桿菌、肺炎桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌、對(duì)各種立克次氏體，原蟲(chóng)及部分病毒有頂頂?shù)囊种谱饔�。氯霉素�?948年上市以來(lái)一直是治療傷副傷寒和沙門(mén)氏菌 的首選藥物。氯霉素內(nèi)服吸收良好。但注射吸收較慢，主要停滯在局部。吸收后全身分布，并聽(tīng)透過(guò)血腦和胎盤(pán)屏障。大部分氯霉素在肝中與葡萄糖醛酸結(jié)合而失活，少部分降解為芳胺。約10%圓形氯霉素經(jīng)腎臟排泄，異能通過(guò)乳汁分泌。肝或腎功能障礙使消除延長(zhǎng)，易發(fā)生蓄積中毒。
氯霉素為白色的針狀或長(zhǎng)片狀結(jié)晶，味極苦，性能極穩(wěn)定，熔點(diǎn)150.5℃-151.5℃，水中微溶（0.25%），易溶于甲丙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中，水溶劑呈中性反應(yīng)，在PH10以上可失去活性。干燥晶體可以存放兩年以上，在酸堿中加熱的條件下能發(fā)生水解。氯霉素耐熱，水溶液煮沸5H也不失效，由于其結(jié)構(gòu)中有發(fā)色基團(tuán)存在，在275-280nm處有較大吸收峰，故可以直接用紫外檢測(cè)器檢測(cè)。
氯霉素作為應(yīng)用廣泛的抗生素，曾對(duì)畜禽疾病控制和治療起到了重要作用，但由于氯霉素存在聯(lián)眾的副作用，能引起人的再生障礙性貧血，粒細(xì)胞缺乏癥等疾病，動(dòng)物食品中氯霉素殘留對(duì)人類的健康構(gòu)成了巨大的威脅，氯霉素的殘留問(wèn)題引起了國(guó)際組織和世界上許多國(guó)家和地區(qū)的高度重視，歐盟、美國(guó)等均在法律規(guī)定氯霉素殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為零容許量，即不得檢出，我國(guó)農(nóng)業(yè)部2002年12月發(fā)布的《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定氯霉素的容量為不得檢出。
現(xiàn)現(xiàn)在已ELISA試劑盒檢測(cè)為例介紹；本試劑盒適用于牛奶、肉類、魚(yú)、蝦、血清、及蜂蜜中的氯霉素殘留量的測(cè)定。
（一）測(cè)定原理
測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體放映。微孔板包被有針對(duì)兔IgG（氯霉素抗體）的羊抗體。加入氯霉素抗體、氯霉素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液、游離氯霉素與氯霉素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)氯霉素抗體，同時(shí)氯霉素抗體與羊抗體連接。沒(méi)有連接的酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被去除。將酶基質(zhì)（過(guò)氧化尿素）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）加入到空中并且孵育。結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使眼色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測(cè)量，吸收光強(qiáng)度與樣品中的氯霉素濃度成正比
（二）試劑盒指標(biāo)
特異性
通過(guò)對(duì)形影的物質(zhì)進(jìn)行交叉反應(yīng)性分析得到
氯霉素 100% 氯霉素堿 0.5% 甲砜霉素 ＜0.05%
余四環(huán)霉素 慶大霉素 變暗霉素 無(wú)交叉反應(yīng)
回收率
牛奶＞80% 魚(yú)蝦肉＞80%
蜂蜜＞80% 蛋類＞80%
（三）提供的試劑
1、96孔（12條*8孔）包被有氯霉素羊抗體。
2、濃縮標(biāo)準(zhǔn)液；為氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、過(guò)氧化物酶標(biāo)記的氯霉素濃縮液：0.7mL
4、氯霉素抗體濃縮液0.7ml
5、基質(zhì)（7ml)含有氧化尿素
6、四甲基聯(lián)苯胺（TMB)30%過(guò)氧化氫，牛血清白蛋白，圖文20等
7、反應(yīng)停止液1mol/L硫酸
8、緩沖液1:100ml用于標(biāo)準(zhǔn) 酶標(biāo)記物 抗體 樣品稀釋
9、緩沖液2：1ml,用于測(cè)定牛奶樣品時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)稀釋用緩沖液
（四）試劑
1乙酸乙酯
2、異辛烷/三氯甲烷（氯仿）：（2:3）
3、Carrez I :0.36mol/L 亞鐵qinghua鉀（II）`3H2O
4、Carrez I I:1.04mol/L硫酸鋅·7H2O
5、PBS緩沖液：0.55gNaH2PO4·H2O+2.85gNaH2PO4·2H2O+9gNaCl加入蒸餾水至1000ml：ph702
(五）
奶樣：
1、取5ml樣品支玻璃離心管。
2、4-12℃3500g離心15min如果沒(méi)有冰凍離心機(jī)可預(yù)先將樣品冷卻到8℃
3、轉(zhuǎn)移上層液至新離心管中。
4、取50微升進(jìn)行測(cè)定
稀釋倍數(shù) 1
檢測(cè)下限50ng/kg
定量檢測(cè)限150ng/kg
牛奶
1、取5ml樣品支玻璃離心管。
2、15℃、3000r/min離心10min
3、3ml上清液與3ml蒸餾水混合，加入250ulCarrez I及250ulCarrez II和4.5ml乙酸乙酯混合10min
4、15℃、3000r/min離心10min
5、將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移至另一瓶中干燥
6、用1.5ml緩沖液I溶解干燥的殘留物，加入1.5ml正乙烷混合。
7、完全除去正乙烷相
8、取出50微升水相驚醒分析
以百分吸光度值為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)氯霉素濃度（ng/kg)的對(duì)半數(shù)值為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，教正曲線在50ng/kg-1350ng/kg范圍內(nèi)為線性，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度（ng/kg）可以從教正曲線上讀出，為了獲得樣品中的氯霉素實(shí)際濃度（ng/kg）,從教正曲線上讀出的濃度值必須誠(chéng)意相對(duì)應(yīng)的析濕系數(shù)。
原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司
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