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鈣鹽染色試劑盒(Von Kossa硝酸銀法)

點擊下載該文件    日期:2015/6/23 15:08:45

產(chǎn)品簡介:
      鈣在人體內(nèi)大量存在,構(gòu)成骨骼作為支持人體的支架,在分泌、運(yùn)送、肌肉收縮、神經(jīng)傳導(dǎo)等也起重要作用。鈣在機(jī)體內(nèi)以兩種形式存在,一種是離子鈣,存在血液循環(huán)內(nèi),即所謂血鈣;另一種是結(jié)合鈣,和蛋白、碳酸或磷酸結(jié)合而沉著在組織內(nèi)。除骨骼和牙齒外,正常時鈣滲透在所有組織和細(xì)胞中,一般丌以固體狀態(tài)出現(xiàn)在組織內(nèi)。但在某些情冴下,鈣析出成固體并沉著于組織內(nèi),則為病理性鈣鹽沉著。沉著的鈣鹽主要是磷酸鈣,其次為碳酸鈣。鈣鹽通常是單折射的,但草酸鈣是雙折射的。當(dāng)使用HE染色時,鈣一般呈紫藍(lán)色。許多染料可以于鈣形成螯合物,包括茜素紅 S、紅紫素、核固紅等。茜素紅S屬一種蒽醌類衍生物,是茜素磺酸鈉鹽,它能不碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物。
      鈣鹽染色常用方法有硝酸銀法和茜素紅S法,Jisskang鈣鹽染色液采用Von Kossa硝酸銀法,其原理在于該法是一種金屬置換法,硝酸銀溶液作用于含有丌溶性鈣鹽的切片時,鈣被銀所置換,銀鹽在光的作用下被還原為黑色金屬銀,適用于大量樣本的鈣鹽組織染色。
自備材料:
1、10%中性福爾馬林固定液
2、系列乙醇
3、蒸餾水
4、顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度 5μm,常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水洗 1min。
4、切片入Von Kossa硝酸銀溶液,強(qiáng)光照射15~60min(見注意事項2)。
5、蒸餾水洗 1min。
6、入海波溶液處理 2min。
7、HE染色液或Van  Gieson復(fù)染細(xì)胞核。
8、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固。
染色結(jié)果:
鈣鹽:黑褐色至深黑色
細(xì)胞核:根據(jù)復(fù)染液不同而不同
背景:紅色
陰性對照:
1、如有必要,可做陰性對照。取另外一張連續(xù)切片脫蠟至水,置于Von Kossa對照液處理20min,流水沖洗 5min。不試驗片一同入Von Kossa硝酸銀溶液,余下步驟同上,結(jié)果為陰性。
注意事項:
1、鈣鹽組織固定以中性福爾馬林為佳,不宜采用 Bouin液等酸性固定液和甲醛鈣固定液。如用常規(guī)的 10%福爾馬林固定,固定4~6h后即可進(jìn)行脫水包埋,以防止固定液酸化導(dǎo)致鈣鹽溶解。
2、作用時間取決于陽光照射時光的強(qiáng)度和時間。如暴露于強(qiáng)光下,15min已經(jīng)足夠;如暴露于紫外燈下,10min即可;如暴露于一般光線下,宜適當(dāng)延長曝光時間。
3、該染色法可以區(qū)分尿酸鹽和鈣鹽,其原理在于鈣鹽丌溶解于碳酸鋰溶液,尿酸鹽易溶解于碳酸鋰溶液,切片經(jīng)碳酸鋰處理后,入硝酸銀溶液并置于強(qiáng)光下,尿酸鹽呈陰性反應(yīng)。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:6個月有效。

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